Definición
La tinción Gram es un tipo de tinción de contraste o tinción diferencial que se utiliza en la práctica clínica para clasificar las bacterias en dos grandes grupos, las Gram-negativas y las Gram-positivas según la composición de su pared celular y su capacidad para captar y retener las tinciones.
También tiñe ciertas levaduras.
Es una de las tinciones más utilizadas universalmente debido a lo económico, sencillo y eficaz que resulta.
El cultivo de microorganismos consiste en proporcionarles las condiciones físicas, químicas y nutritivas adecuadas para que puedan multiplicarse de forma controlada. Posteriormente se realizan pruebas específicas para identificar la especie y, si se requiere, se puede practicar un antibiograma para evaluar la sensibilidad antibiótica.
Forma en que se realiza
A partir de una muestra a estudiar se procede a realizar la tinción y observación bajo el microscopio óptico. El resultado se entrega de inmediato.
Posteriormente el laboratorio selecciona los medios de cultivo y espera hasta que se desarrollen (o no) microorganismos.
Indicaciones
Para el estudio y diagnóstico de múltiples patologías dermatológicas como uretritis, celulitis purulenta, fasceitis necrotizante, etc.
Contraindicaciones
No posee
Resultados
La tinción gram indica la presencia de bacterias intra o extra celulares, si son gram positivas o negativas, además de su cantidad, morfología y agrupación.
Puede ser positivo o negativo, según se desarrollen patógenos o no. Para un cultivo positivo se informa el microorganismo identificado con su respectiva susceptibilidad a antimicrobianos cuando corresponde. Se notifican todos los resultados, incluidos los presuntos contaminantes. Para un cultivo negativo se indica el período de incubación durante el cual no se observó desarrollo
Interpretación
1) Tinción:
Para su interpretación se debe tener en cuenta el cuadro clínico del paciente más el origen de la muestra. La tinción solo entrega aspectos físicos de la bacteria (tinción, agrupación y morfología) por lo que siempre es orientadora (y no diagnóstica) de un agente etiológico.
El único caso en el cual la tinción gram es diagnóstica por si sola es en el estudio de un hombre con sospecha de uretritis gonococcica, en quien el resultado de diplococos gram negativos intracelulares es suficiente para establecer el diagnóstico.
Muestra de sitios estériles: se consideran sitios esteriles el líquido cefalorraquídeo, líquido pleural, líquido pericárdico, líquido sinovial y líquido peritoneal. La presencia de cualquier agente en cualquiera de estas muestras es significativa
Muestra de sitios no estériles: se incluyen por ejemplo el frotis de garganta, frotis de la herida y frotis genitales. En este caso es usual encontrar flora normal, células epiteliales y leucocitos.
2) Cultivos:
La presencia de un cultivo positivo debe interpretarse en relación al cuadro clínico. Dependiendo del origen de la muestra es posible encontrar flora residente la cual normalmente no es patógena.
Signos de alarma
No se describen para este examen
Riesgos
No se describen para este examen
Bibliografía
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Definición
El diagnóstico serológico de la sífilis comprende dos grupos de pruebas: no treponémicas y treponemicas.
1) Pruebas no treponemicas: buscan anticuerpos IgG e IgM dirigidos contra el antígeno cardiolipina-colesterol-lecitina, material lipoidal liberado por la destrucción de las células del huésped, siendo esta destrucción causada por el treponema o por otro motivo. Por lo tanto, son pruebas inespecíficas que pueden arrojar falsos positivos, pero sirven como parte del estudio inicial por su relativo bajo costo. Algunas son RPR (rapid plasma reagin), USR (unheated serum reagin) y VDRL (venereal disease research laboratory). El RPR es solo cualitativo, por lo que solo sirve de screening, mientras que el USR y el VDRL son cuali y cuantitativos, por lo que sirven de screening y como control de tratamiento, ya que los títulos disminuyen con el, pudiendo hasta negativizarse, por lo que son útiles en el diagnóstico de las reinfecciones. Sólo la prueba VDRL está validada para la detección de anticuerpos no treponémicos en LCR y, en consecuencia, es el único útil para el diagnóstico de neurosífilis, (junto a una treponémica en suero).
2) Pruebas treponemicas: buscan anticuerpos IgM e IgG dirigidos específicamente contra el treponema, por lo que son pruebas que confirman el diagnóstico. Estas pruebas son muy sensibles y muy especificas. Son cualitativas y permanecen reactivas de por vida, por lo que no sirven para monitoreo de terapia ni para reinfecciones y no están estandarizadas para el diagnóstico de neurosifilis. Algunas son FTA-ABS (Fluorescent Treponemal Antibody Absorption) y MHA-TP (Micro Hemagglutination Assay for antibodies to Treponema pallidum)
Forma en que se realiza
Solo se requiere de una muestra de suero para realizar la prueba.
Si se desea hacer el diagnostico de neurosifilis, se requiere de liquido cefalorraquídeo para realizar un VDRL con el.
Es importante destacar que las pruebas serológicas tardan entre 3-4 semanas en hacerse positivas desde la infección (7-21 dias de aparecido el chancro).
Indicaciones
El VDRL es usado como método de screening para la sífilis, aplicado a grandes poblaciones por su bajo costo y sensibilidad y especificisdad aceptable, siendo parte del examen de medicina preventiva del adulto (EMPA) y como examen de elección en embarazadas en el primer control del embarazo, en la semana 20-24 y 32-34
En pacientes cuya sospecha clínica de sífilis es alta se recomienda realizar ambas pruebas de inmediato (treponemicas y no treponemicas).
Contraindicaciones
Las pruebas treponemicas no deben realizarse en pacientes con el antecedente de sífilis, ya que saldrán siempre reactivas y pueden llevar a error diagnóstico.
Resultados
1) VDRL: los resultados posibles son 4: no reactivo, reactivo débil, reactivo sin diluir y reactivo en una dilución específica. Las diluciones son 1:1 (sin diluir), 1:2, 1:4, 1:8, 1:16 y 1:32. Siempre se informa la última dilución positiva.
2) MHA-TP: los resultados posibles son 2: reactivo y no reactivo. La intensidad de la reacción se declara en cruces, de acuerdo a la intensidad de la aglutinación de la prueba. No está demostrada la utilidad de cuantificar el resultado.
Interpretación
1) Pruebas no treponemicas: mientras mayor es el denominador se considera que la muestra está más diluida, por lo que su positividad indica mayor concentración de anticuerpos. Así, una dilución reactiva 1:8 es mayor que 1:4.
El diagnóstico de sífilis se realiza con un título 1:8 o mayor. Titulaciones menores en ausencia de clínica característica requieren de serología específica.
El control de tratamiento depende de la etapa de la sífilis:
Sífilis primaria debe negativizarse en un año
Sifilis secundaria debe negativizarse en 2 años
Pacientes infectados por más de dos años solo negativizan el 20-30% en 5 años, el resto permanece positivo.
El aumento sostenido en 2 o mas diluciones traduce reinfección.
En sífilis perinatal se considera diagnóstico un VDRL positivo mayor que la madre o en cifras crecientes
Siempre se debe tener en cuenta que estas pruebas tienen muchos falsos positivos, siendo sus causas:
Agudas: Inmunizaciones, fenómeno de prozona, neumonía viral, varicela, paludismo, sarampión, embarazo, herpes genital, mononucleosis, consumo de drogas por vía parenteral, HIV, leptospirosis, borreliosis
Cronicas, envejecimiento, trastornos autoinmunitarios, lupus eritematoso sistémico, lepra, artritis reumatoide, consumo de drogas por vía parenteral, neoplasias
Para diferenciarlo es útil tener en cuenta que generalmente un falso positivo no supera los títulos de 1:4 o 1:8
Un resultado negativo no descarta sífilis en incubación
2) Pruebas treponémicas:el resultado positivo confirma el diagnóstico de sifilis. Recordar que si el paciente tuvo la infección previamente estas pruebas siempre saldrán positivas.
También poseen falsos positivos, siendo sus causas: mononucleosis, lepra, enfermedad de colágeno, borreliosis, leptospirosis, HIV, anemia hemolítica autoinmune, adictos a drogas por vía parenteral. Al ser pruebas cualitativas no es posible diferenciarlo por los títulos.
Signos de alarma
No se describen para ninguna prueba
Riesgos
No posee
Bibliografía
http://www.ispch.cl/sites/default/files/Sifilis%20Tecnicas%20Treponemicas.pdf
http://www.ispch.cl/sites/default/files/Sifilis%20Tecnicas%20No%20Treponemicas.pdf
