Sembrar muestras para cultivo

Nivel de manejo por el médico general: Realizar.

INTRODUCCIÓN:

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porción de muestra (inóculo) en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano para su desarrollo y multiplicación. El método de siembra a emplear dependerá de los objetivos que se pretendan alcanzar con el cultivo, ya que en ocasiones se requiere que el desarrollo del microorganismo se produzca de forma masiva, mientras que en otras resulta indispensable que las colonias queden aisladas o que las manifestaciones del metabolismo tengan lugar con tensiones reducidas o privadas de oxígeno.

INDICACIONES:

• Cuando hay infección.
• Si se requiere confirmar etiología con fines epidémicos.
• Si se requiere tratamiento ATB sistémico (para iniciar o ajustar tratamiento).

CONTRAINDICACIONES:

• No tiene.

MATERIALES E INSUMOS:

• Asa de siembra.
• Tubo con cultivo.
• Placas de Petri con medio de cultivo sólido y cultivo de microorganismos.
• Mechero.
• Guantes estériles.

PROCEDIMIENTO:

1. Técnica de siembra para aislamiento:

• Estrías múltiples:

i. Con asa de siembra se toma muestra del cultivo de microorganismo y se extiende sobre un área pequeña de la superficie de la placa con agar nutritivo, en forma de estrías muy juntas, pero sin hacer presión para no dañar el agar.

ii. Se flamea el asa, se enfría y después de rozar la siembra realizada previamente, se extiende de nuevo por otra zona de la placa haciendo nuevas estrías. Se repite sucesivamente.

iii. Se lleva la placa a incubar en posición invertida a la temperatura adecuada.

iv. Finalmente se obtienen colonias aisladas a partir de muestra con elevado número de gérmenes.

• Técnica de los 4 cuadrantes:

i. Se divide la placa en cuatro cuadrantes.

ii. Se toma el inóculo y se siembra consecutivamente en cuatro cuadrantes.

iii. Incubar.

• Siembra por agotamiento:

i. Se realiza una descarga de muestra y se realiza estría por toda la placa.

2. Técnica de siembra para recuento:

• Técnica de Barry:

i. En placa de Petri vacía se deposita un volumen conocido de muestra.

ii. Se añade el medio de cultivo (agar nutritivo) fundido y atemperado (45°C aproximadamente).

iii. Se mezclan ambos por rotación suave de la placa de forma que los microorganismos se distribuyan de forma homogénea en el medio de cultivo permitiendo el desarrollo de colonias varadas por todo el agar.

• Técnica de inoculo a dilución conocida y con asa de Dygraski (Barry modificado):

i. Depositar sobre la superficie de una placa con agar nutritivo una gota o 0,1 ml. de una determinada solución de cultivo de microorganismo y extenderlo con ayuda del cayado en todas direcciones hasta que esté completamente seco.

ii. Incubar la palca en posición invertida a la temperatura deseada (técnica para aislamiento de colonias que permite el recuento de bacterias viables en la muestra, si conocemos la dilución).

BIBLIOGRAFÍA:

1. http://gsdl.bvs.sld.cu/cgi-bin/library?e=d-00000-00-off-0preclini–00-0–0-10-0-0-0direct-10-4—0-1l–11-kk-50-20-about-00-0-1-00-0-0-11-1-0utfZz-8-00&a=d&cl=CL1&d=HASH01ebc63ab80c0bbb5a182dab.20.4